大腸桿菌的培養用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可
信息分類：生命科學資訊 作者:yiyi發布
大腸桿菌(Escherichia coli)的培養
以LB培養液(Luria或Lenox broth)培養E.Coli, 高溫高壓消毒后使用.
若製作平盤或洋菜斜面, 則在上述成分外, 再加1.5﹪(w/v)的洋菜粉.若尚需加入抗生素等, 可在消毒后, 待液體冷卻至約50℃時, 加入溷和.
若製作軟洋菜覆蓋層之洋菜, 則用0.7﹪(w/v)的洋菜量即可. 一般若添加抗生素, 其濃度如下：
儲存液濃度
使用液濃度
Ampicillin
4mg/ml
50μg/ml
Chloramphenicol
10mg/ml
(溶于甲醇)
20μg/ml
若是加其他化合物, 參考濃度如下：
儲存濃度
使用液濃度
Isopropyl-I-
100mM
0.1mM
thio-β-D-
(23.8mg/ml)
(每平盤加儲存液40μl)
galactoside (IPTG)
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-
20mg/ml
20ug/ml
galactoside(X-ga
(溶于N.N.dimethyl)
(每平盤加儲存液100μl)
l)
Formamide
將E.coli培養在LB中, 37℃, 300rpm, 振盪培養過夜, 可得約 1-2×107cells/ml, 亦可用光譜儀測0D600, 大約每0.10D相當108cells/ml, 亦可用稀釋涂平盤法計算Colony Forming Unit (CFU)/ml, 若想分離此菌, 可以稀釋涂平法或平盤劃線法為之. 保存此菌, 可將此菌加入下列兩種溶液中任一種, 并保存在-70℃, 需用時, 吸取部分, 用于培養即可.
溶液一：glycerol solution
65﹪glycerol (v/v)
0.1M MgSO4
0.025M Tris.Cl, pH8
溶液二：DMSO Solution
7﹪(v/v) dimethylsulforide (DMSO)
※溶液一需經高溫高壓消毒, 溶液二不必.
實 驗：E.coli成長曲線
材料與方法：
LB培養液及平盤
E.coli
自動計時器
生理實鹽水(0.9﹪)4.9ml in 13×100螺蓋試管(均經消毒)
Micropipettor
pipette tips
Spreader
37℃ incubatorn
37℃恆溫振盪培養箱
本生燈
酒精
以稀釋涂平盤法為之, 每30min計數一次, 以180分鐘為之.